【摘要】目的：分析食品中空腸彎曲菌定量檢測結果的不確定度評定。方法：根據《國家食品安全風險評估中心2019年國家食品污染和有害因素風險監測工作手冊》展開樣本測定，由JJF 1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》探究不確定度來源，并計算不確定度各分量，分析食品中空腸彎曲菌定量檢測結果的不確定度評定。結果：電子天平、玻璃量器、移液器、重復檢測相對標準不確定度0.0011545、0.0057733、0.0034640、0.01739965;平板計數方式合成不確定度、拓展不確定度為0.01869263、0.0373852。結論：通過逐一評定電子天平、玻璃量器、移液器、樣本重復檢測等產生的不確定度可對食品中空場彎曲菌不確定度作出有效估測，對提高檢驗結果有效性具有積極作用。

　　【關鍵詞】樣本重復檢測;玻璃量器;評估不確定度

　　空腸彎曲菌菌體輕度彎曲與逗點狀相似，長1.5-5um，寬0.2-0.8um。菌體一端、兩端有單鞭毛，運動活潑。抵抗力較弱，易為干燥、直射日光、弱消毒劑殺滅[1-2]。為牛、羊、狗及多種禽類寄居菌。可使蔬菜、水果、多種熟食、牛奶等受到此菌污染，導致人類中毒。為一種人畜共患病病菌，導致人、動物發生多種疾病，且是食物性病原菌，認為與全世界人類細菌性腹瀉有較大關聯。測量不確定度在一定程度上反映測量結果的質量，不確定度越小，實驗結果與真實值越接近。本研究通過樣品測定探究不確定度來源，如下文。

　　1資料與方法

　　1.1一般資料

　　根據《國家食品安全風險評估中心2019年國家食品污染和有害因素風險監測工作手冊》展開樣本測定，由JJF 1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》探究不確定度來源，并計算不確定度各分量。

　　1.2方法

　　根據有關彎曲菌檢驗操作程序第二法平板計數方式展開彎曲菌檢測，選取空腸彎曲菌標準菌株菌懸液加入適量空腸彎曲菌陰性禽胴體內，倒入適量蛋白胨水后放在一定速度的振蕩器上振蕩15min，嚴格遵守無菌操作要求將禽胴體取出，余下液體為待測液樣本原液。使用合適移液器吸取適量待測原液倒入適量生理鹽水內，搖晃確定混合充分，得到第一份具有一定比例的勻液。將得到的具有一定比例的勻液再加入適量生理鹽水，重復以上步驟，再次得到一定比例的勻液。

　　在制備樣本勻液過程中，每進行一次遞增稀釋，需更換一次無菌吸頭。選2個稀釋度合適的樣本勻液，每份樣本勻液稀釋度為100uL，迅速涂布在選擇性瓊脂平板上，在每個稀釋度進行平行接種。放于合適條件下，培養48h。在可疑菌落數在15-150CFU/板的稀釋度相同的兩塊平板上選取不少于5個菌落，在選取的菌落上，劃線接種哥倫比亞血瓊脂展開純培養，培養條件同之前。

　　1.3臨床評價

　　觀察電子天平、玻璃量器、移液器等樣品稱量、重復性檢驗、食品中空腸彎曲菌平板計數方式合成不確定度、拓展不確定度等實驗檢測結果。

　　結果

　　2.1樣品稱量不確定度評定

　　電子天平、玻璃量器、移液器不確定引入：經研究發現使用電子天平稱量1000g樣品共需稱量2次，不確定引入：標準不確定度=0.2886750;相對標準不確定度=0.0011545。：經研究發現使用玻璃量器量取500ml緩沖蛋白胨，根據量筒允許最大誤差，不確定引入：標準不確定度=2.8867511;相對標準不確定度=0.0057733。經研究發現使用移液器倍比稀釋2次、加樣4次，不確定引入：標準不確定度=0.5773501;相對標準不確定度=0.0034640。

　　2.2樣本重復檢測不確定度引入

　　經研究發現urel(重復檢測)=0.01739965。

　　2.3食品中空腸彎曲菌平板計數方式合成不確定度、拓展不確定度

　　經研究發現，合成不確定度需綜合電子天平、玻璃量器、移液器及重復檢測的不確定度結果，得到此次實驗的U(合成)=0.01869263;選取置信概率P為95%，確定包含因子K為2 ，計算拓展不確定度，得到此次實驗的拓展不確定度(U95rel)=0.0373852。

　　食品論文投稿期刊：《食品安全導刊》雜志是由中國商業聯合會主管，中國商業股份制企業經濟聯合會及北京肉類食品協會聯合主辦，是國家新聞出版總署正式批準的一本全面關注食品安全政策、標準、技術、信息的行業期刊。

　　3討論

　　不確定度來源在微生物檢測中較分散，與實驗使用試劑質量、設備、環境等因素均有聯系。本次實驗嚴格遵照相關彎曲菌檢驗流程進行操作，選用人工污染樣本，可將“基質”對檢測結果的影響忽視[3]。對使用的試劑、培養基等都展開了質量控制，對添加、沒有添加陽性菌株的樣本進行對比分析，監控實驗操作環境，對實驗使用的高壓滅菌器、移動紫外車及微需氧工作站等儀器設備都進行檢驗，確保合格后進行使用。

　　本研究電子天平、玻璃量器、移液器、重復檢測相對標準不確定度0.0011545、0.0057733、0.0034640、0.01739965;平板計數方式合成不確定度、拓展不確定度為0.01869263、0.0373852。提示重復檢測對合成不確定度貢獻高于電子天平、玻璃量器、移液器，玻璃量器對合成不確定度貢獻次于重復檢測，電子天平、移液器對合成不確定度貢獻較低。

　　表明微生物實驗使用的試劑、相關儀器設備及檢驗人員操作步驟等均會對微生物實驗檢驗結果有效性參數一定程度影響。通過了解對微生物實驗檢驗結果產生影響的因素，在微生物實驗實施過程中進行對應質量控制，減少微生物實驗使用的試劑、相關儀器設備及檢驗人員操作步驟等對檢驗結果的影響，提高微生物實驗檢驗結果準確、有效性。

　　綜上所述，通過逐一評定電子天平、玻璃量器、移液器、樣本重復檢測等產生的不確定度可對食品中空場彎曲菌不確定度作出有效估測，對提高檢驗結果有效性具有積極作用。

　　參考文獻：

　　[1]熊素平, 聶晶晶, 陳凱,等. 食品中空腸彎曲菌定量檢測結果的不確定度評定[J]. 醫藥論壇雜志, 2019, 40(10):111-114.

　　[2]彭志蘭, 林吉恒, 黃朱梁,等. 基質輔助激光解析電離-飛行時間質譜法快速鑒定餐飲食品中的空腸彎曲菌[J]. 食品安全質量檢測學報, 2020, 11(09):292-297.

　　[3]申進玲, 趙麗娜, 蔣原,等. 含內標的多重實時PCR法同時檢測空腸彎曲菌和結腸彎曲菌[J]. 食品安全質量檢測學報, 2019, 10(07):110-118.

　　作者：張粉娥 1 郭強 2