《五味子酸性多糖對(duì)小鼠抗疲勞作用的實(shí)驗(yàn)研究》論文發(fā)表期刊：《北華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)》；發(fā)表周期：2020年06期

《五味子酸性多糖對(duì)小鼠抗疲勞作用的實(shí)驗(yàn)研究》論文作者信息：牛佳牧( 1966—) ，女，副研究員，主要從事中藥藥理學(xué)研究

　　摘要：目的 探討五味子酸性多糖(Schisandra chinensis acidic polysaccharide，SCPA)對(duì)小鼠抗疲勞的作用機(jī)制.

　　方法 將ICR小鼠隨機(jī)分為4組，即空白對(duì)照組(CON)、低劑量SCPA組、中劑量SCPA組、高劑量SCPA組.通過負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)及前肢握力實(shí)驗(yàn)觀察SCPA對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)耐力的影響;化學(xué)比色法檢測(cè)小鼠血清中尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)和乳酸(lactic acid，LA)、骨骼肌組織中丙二醛(malondialdehyde，MDA)和8羥基脫氧鳥苷(8-hydroxy-2'deoxyguanosine，8-0HdG)的水平結(jié)果 與CON組比較，SCPA組的運(yùn)動(dòng)耐力均顯示出不同程度的增強(qiáng)(P<0.05或P<0.01);BUN、LA、MDA及8-0HdG水平均顯著降低(P<0.05或P<0.01).結(jié)論SCPA對(duì)小鼠具有抗疲勞作用，該作用可能與其降低骨骼肌氧化損傷有關(guān).

　　關(guān)鍵詞：五味子;酸性多糖;抗疲勞

　　Abstract: Objective To observe the anti-fatigue effect of Schisandra chinensis acidic polysaccharide (SCP-A)on mice. Method ICR mice were randomly divided into four groups, namely blank control group (CON) , lowdose SCP-A group, medium-dose SCP-A group, highose SCP-A group. Observe the effects of SCPA on the exercise endurance of mice through weight-bearing swimming experiments and forelimb grip strength experimentsTo detect blood urea nitrogen (BUN), lactic acid (LA) and skeletal muscle tissue in mice serum, the levels of malondialdehyde (MDA) and 8-hydroxy-2' -deoxvguanosine (8-OHdG) by using chemical colorimetry.

　　Results Compared with the CON group, the exercise endurance of the SCP-A group showed different degrees of enhancement (P<0.05 or P<0.01); BUN, LA, MDA and 8-OHdG levels were significantly reduced (P<0.05 or P<0.01) . Conclusion SCP-A has an anti-fatigue effect on mice, which may be related to its reduction of skeletal muscle oxidative damage.

　　Key words: Schisandra chinensis; acid polysaccharide ; anti-fatigue

　　隨著社會(huì)生活節(jié)奏的加快，疲勞已逐漸成為影響人們生活質(zhì)量的主要健康問題最新的研究[表明：未來全球亞健康的人口比例將達(dá)到75%，其中，慢性疲勞綜合征(Chronic Fatigue Syndrome，CFS)是其主要的表現(xiàn)形式.當(dāng)機(jī)體長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行超負(fù)荷的體力勞動(dòng)而并未得到及時(shí)緩解時(shí)，會(huì)產(chǎn)生一系列的生理變化，大量的代謝廢物在體內(nèi)聚集，進(jìn)而造成機(jī)體運(yùn)動(dòng)耐力的暫時(shí)下降，最終產(chǎn)生一定的疲勞感覺21.疲勞嚴(yán)重時(shí)還會(huì)傷及機(jī)體其他的組織和器官，進(jìn)而產(chǎn)生各種疾病[4，因此，開發(fā)一種具有抗疲勞作用的保健食品意義重大.

　　五味子(Schisandra chinensis(Turcz.)Baill)為長(zhǎng)白山道地藥材，具有豐富的多糖及木脂素等活性成分.近年的研究74表明：五味子多糖具有抗氧化、抗感染、護(hù)肝等功效，安全性較好，因此，受到越來越多的學(xué)者關(guān)注·本研究中的北五味子酸性多糖(Schisandra chinensis acidic polysaccharide，SCP-A)是從北五味子總多糖中分離提取得到的酸性多糖成分，目前，關(guān)于SCPA對(duì)小鼠抗疲勞作用尚未見報(bào)道，因此，本研究通過給予小鼠低、中、高3種不同劑量的SCPA觀察其抗疲勞作用，為研發(fā)具有抗疲勞相關(guān)功能的藥物或保健食品提供理論依據(jù)

　　1材料與方法

　　1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與試劑

　　健康雄性ICR小鼠(合格編號(hào)：SCXK(吉)20190008，長(zhǎng)春億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司)40只，體質(zhì)量(20±2)g SCP-A(北華大學(xué)五味子開發(fā)及產(chǎn)業(yè)化工程研究中心);尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、乳酸(lactic acid，LA)、丙二醛(malondialdehyde，MDA).8羥基脫氧鳥苷(8hydroxy-2'deoxyguano-sine，8-OHdG)檢測(cè)試劑盒(南京建成生物工程研究所)

　　1.2 實(shí)驗(yàn)方法

　　1.2.1 動(dòng)物分組及給藥

　　將雄性ICR小鼠隨機(jī)分成4組：空白對(duì)照組、低劑量組(5 mg/kg)、中劑量組(10 mg/kg)、高劑量組(20 m g/kg)，每組10只，實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行小鼠適應(yīng)性實(shí)驗(yàn).

　　1.2.2 小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)

　　末次給藥30 min后進(jìn)行小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)·將小鼠置于溫度(25±5)℃、水面高度20cm的塑料容器中，并在小鼠尾部負(fù)荷相當(dāng)于體質(zhì)量10%的鉛塊進(jìn)行游泳訓(xùn)練，以小鼠沉入水面10s不能浮出水面的時(shí)間作為力竭游泳時(shí)間t01.2.3 小鼠前肢握力實(shí)驗(yàn)

　　根據(jù)小鼠善于攀爬、喜愛用爪抓取物品的習(xí)性，設(shè)計(jì)小鼠前肢握力實(shí)驗(yàn)".在末次給藥30 min后，應(yīng)用握力測(cè)試儀進(jìn)行測(cè)試，并記錄小鼠的最大握力.

　　1.2.4 小鼠體內(nèi)疲勞指標(biāo)BUN，LA水平的測(cè)定

　　末次給藥60min后，將小鼠麻醉后進(jìn)行眼眶取血，于3500 r/min、4℃的條件下離心15 min制備血清，并取骨骼肌組織，用生理鹽水漂洗后凍存于-80℃中備用.按照試劑盒所提供的檢測(cè)方法檢測(cè)小鼠血清中BUN、LA的水平

　　1.2.5 小鼠體內(nèi)氧化指標(biāo)MDA，8-0HdG水平的測(cè)定

　　取上述實(shí)驗(yàn)所制備的小鼠骨骼肌組織，檢測(cè)骨骼肌組織中氧化指標(biāo)MDA.8-0HdG的水平.

　　1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

　　應(yīng)用SPSS 19.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，小鼠負(fù)重游泳時(shí)間、前肢握力數(shù)值、BUN，LA及骨骼中MDA，8-OHdG水平的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(xts)表示，組間兩樣本均數(shù)比較采用1檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

　　2結(jié)果與分析

　　2.1 負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)和前肢握力實(shí)驗(yàn)觀察SCPA對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)耐力的影響負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組比較，5、10.20 mg/kg酸性多糖組小鼠力竭游泳時(shí)間均顯著延長(zhǎng)(P<0.05或P<0.01)，且20 mg/kg與5mg/kg酸性多糖組比較小鼠游泳時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P<0.01);小鼠前肢握力實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與空白組比較，5 mg/kg劑量組無顯著性差異(P>0.05)，10 mg/kg及20mg/kg劑量酸性多糖組小鼠前肢握力數(shù)值顯著增加(P<0.01)，其中20mg/kg與5 mg/kg酸性多糖組比較小鼠前肢握力數(shù)值顯著增加(P<0.05).結(jié)果見表1以上結(jié)果提示：SCP-A能夠增強(qiáng)小鼠運(yùn)動(dòng)耐力，且該作用可能具有劑量依賴性.

　　2.2 SCPA對(duì)小鼠血清中BUN、LA含量的影響

　　各組小鼠血清中BUN含量檢測(cè)結(jié)果顯示：與空白組比較，10 mg/kg及20 mg/kg酸性多糖組小鼠血清中BUN水平顯著降低(P<0.05或P<0.01)，且 20 mg/kg酸性多糖小鼠血清BUN較5 mg/kg組顯著降低(P<0.01);LA檢測(cè)結(jié)果顯示：與空白組比較，各劑量酸性多糖組小鼠血清中LA水平均顯著降低(P<0.05或P<0.01);且20 mg/kg酸性多糖小鼠血清LA較5 mg/kg組顯著降低(P<0.05).見表2.以上結(jié)果提示：SCPA能夠降低運(yùn)動(dòng)小鼠血清BUN和LA含量，具有一定的抗疲勞作用，且該作用可能具有劑量依賴性.

　　2.3 SCPA對(duì)小鼠骨骼肌中MDA.80HdG含量的影響

　　小鼠骨骼肌中氧化相關(guān)指標(biāo)MDA.8-0HdG含量檢測(cè)結(jié)果顯示：與空白組比較，5 mg/kg劑量組小鼠MDA水平無顯著差異：10，20 mg/kg酸性多糖組小鼠骨肌中MDA、8-0HdG水平均顯降低(P<0.05或P<0.01)，且20mg/kg酸性多糖組較5mg/kg組顯著增加(P<0.05或P<0.01)，見表3以上結(jié)果提示：SCPA在運(yùn)動(dòng)小鼠骨骼肌組織中表現(xiàn)出顯著的抗氧化作用，且該作用可能具有劑量效應(yīng)關(guān)系.

　　3討論

　　近年來，越來越多的中藥因具有緩解疲勞的作用而應(yīng)用于抗疲勞領(lǐng)域.在臨床上運(yùn)用中醫(yī)理論，合理配伍中藥能夠有效消除人體負(fù)荷運(yùn)動(dòng)后產(chǎn)生的疲勞，從而減輕其對(duì)人體產(chǎn)生的不利影響[12].本研究所選用的五味子酸性多糖是北五味子的主要活性成分之一，與木脂素類成分相比具有含量高、毒性低等優(yōu)點(diǎn)，因此，其研究?jī)r(jià)值較高、運(yùn)動(dòng)耐力實(shí)驗(yàn)及生化指標(biāo)檢測(cè)是評(píng)價(jià)體力疲勞的兩種主要方法[13，其中，運(yùn)動(dòng)耐力的提高可直觀反映出機(jī)體抗疲勞能力的增強(qiáng)[1443，本研究采用了負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)及前肢握力實(shí)驗(yàn)兩種經(jīng)典行為學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，觀察受試動(dòng)物的肌肉力量變化，提示機(jī)體的疲勞狀態(tài).負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)是評(píng)價(jià)藥物抗疲勞作用最常用、最客觀的指標(biāo)[1]，負(fù)重游泳時(shí)間越長(zhǎng)，則表明藥物的抗疲勞效果越好，本研究結(jié)果顯示：經(jīng)不同劑量的SCPA處理后各組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間明顯增加;前肢握力實(shí)驗(yàn)中，10.20 mg/kg酸性多糖組小鼠的前肢握力數(shù)值同樣明顯增加，表明了SCPA能夠提高小鼠的運(yùn)動(dòng)耐力，具有一定的抗疲勞作用.

　　為進(jìn)一步明確SCPA的抗疲勞作用，本研究對(duì)小鼠血清中BUN、LA等評(píng)估機(jī)體疲勞程度最經(jīng)典指標(biāo)進(jìn)行觀察.BUN是人體蛋白質(zhì)分解代謝的產(chǎn)物，運(yùn)動(dòng)時(shí)機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)和氨基酸分解代謝會(huì)加強(qiáng)，尿素生成增多，使BUN水平升高18 同時(shí)，長(zhǎng)時(shí)間、大強(qiáng)度的運(yùn)動(dòng)還會(huì)導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)糖原的大量消耗及LA等代謝產(chǎn)物的堆積，最終導(dǎo)致肌肉疲勞[1921.本研究結(jié)果顯示：與CON組比較，10.20 mg/kg給藥組小鼠血清中BUN和LA的水平均明顯降低，進(jìn)一步證實(shí)了SCPA具有較好的抗疲勞作用.

　　由于劇烈運(yùn)動(dòng)會(huì)加速自由基的產(chǎn)生，因此，也會(huì)造成氧化應(yīng)激損傷的發(fā)生[224，本研究對(duì)小鼠骨骼肌中氧化相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行了檢測(cè)，8-0HdG作為DNA氧化損傷的重要標(biāo)志物，能夠衡量機(jī)體細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激水平，其數(shù)值越高顯示機(jī)體損傷程度越嚴(yán)重[2 MDA作為脂質(zhì)過氧化作用的終產(chǎn)物，同樣是反應(yīng)自由基損傷的重要指標(biāo)，其含量可間接反映細(xì)胞受自由基損害和過氧化的程度28-29 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：SCPA可以降低疲勞小鼠骨骼肌中MDA.8-0HdG水平，提示SCPA在疲勞小鼠中表現(xiàn)出顯著的抗氧化作用.

　　本研究依據(jù)前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選用低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)3種劑量SCPA對(duì)抗疲勞作用進(jìn)行觀察.研究結(jié)果顯示：高劑量(20 mg/kg)及中劑量(10mg/kg)組對(duì)運(yùn)動(dòng)耐力及疲勞、氧化等測(cè)定指標(biāo)均具有顯著影響，而低劑量(5 mg/kg)對(duì)BUN、LA、MDA等指標(biāo)的影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).提示SCPA對(duì)小鼠的抗疲勞作用可能與劑量呈現(xiàn)一定的關(guān)系，其具體的劑量效應(yīng)關(guān)系將在后續(xù)的研究中進(jìn)行觀察.綜上，SCP-A具有顯著的抗疲勞作用，其機(jī)制可能為通過提高機(jī)體抗氧化能力而發(fā)揮抗疲勞作用

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