《桔梗根提取物不同溶劑萃取物的抗氧化活性》論文發表期刊：《食品研究與開發》；發表周期：2021年01期

《桔梗根提取物不同溶劑萃取物的抗氧化活性》論文作者信息：許瑞如（1995—），女（漢），碩士研究生，研究方向：農產品加工及貯藏工程。

　　摘要：該試驗對桔梗根提取物用不同溶劑進行萃取，并對不同溶劑萃取物中總多酚、總黃酮的含量和抗氧化活性進行比較分析。選取石油醚、正丁醇、乙酸乙酯和正己烷對桔梗根提取物水溶液進行液-液萃取，得到樣品不同溶劑萃取物。測定不同溶劑萃取物總多酚、總黃酮的含量及其抗氧化活性。桔梗根提取物正丁醇萃取物中總多酚含量最高，石油醚萃取物中總黃酮含量最高。各溶劑萃取物表現出不同程度的抗氧化活性，并呈現劑量依賴性，順序均為：正丁醇>石油醚>乙酸乙酯>正己烷。正丁醇和石油醚萃取物可被用于總多酚和總黃酮的分離純化;綜合考慮抗氧化活性，正丁醇萃取物可被用來作為天然抗氧化劑應用于食品和藥品領域。

　　關鍵詞：桔梗;萃取物;多酚;黃酮;抗氧化活性

　　Abstract: The extracts of Platycodon grandijlorum root were extracted with different solvents, and the content and antioxidant activity of total polyphenols and total flavonoids in different solvent extracts were compared and analyzed. Petroleum ether, n-butanol, ethyl acetate and n-hexane were used to perfomm liquid-liquid extraction on the aqueous solution of Platycodon grandiflorum root extract to obtain different solvent extracts of the sample.

　　The content of total polyphenols and total flavonoids in different solvent extracts and their antioxidant activity were determined. The extract of Platycodon grandiflorum root extract had the highest total polyphenol content and the petroleum ether extract had the highest total flavonoid content. Each solvent extract exhibited different degrees of antioxidant activity and showed a dose-dependent order in the order: n-butanol, petroleum ether, ethyl acetate and n-hexane. The extracts of n-butanol and petroleum ether could be used for the separation and purification of total polyphenols and total flavonoids. Considering the antioxidant activity, n-butanol extract could be used as a natural antioxidant in food and phamaceutical fields.

　　Key words: Platycodon grandiflonum; extracts; polyphenols; flavonoids; antioxidant activity

　　桔梗(Platycodon grandiflorum)為桔梗科桔梗屬的草本植物，又名包袱花、鈴鐺花、僧帽花"。從古至今，既可被用作食物原料，又可被用作藥材。桔梗具有廣泛的藥理活性，對多種疾病均有很好的治療作用。中藥與合成的抗生素、抗氧化劑及抗炎藥物相比，具有低毒、無殘留、副作用小等優點"。隨著人們對傳統藥食同源越來越深入的研究，植物提取物被廣泛的用作天然抗氧化劑、抑菌劑等。

　　人體的生命活動伴隨氧化反應，產生大量的氧自由基，大量的氧自由基會引起氧化損傷，長期處于氧化損傷狀態會引起大量慢性疾病。故近年來國內外很多學者致力于抗氧化劑的篩選，天然抗氧化劑由于自身的優勢，成為食品和醫藥的研究熱點。單一的抗氧化體系不能全面的說明物質的抗氧化能力，為了更好地評價物質的綜合抗氧化性，通常測定總還原能力、超氧陰離子自由基清除能力、羥自由基清除能力、DPPH·清除能力、ABTS"清除能力0-10，便于全面的分析物質的抗氧化性。

　　目前關于桔梗中的活性物質的主要提取方法有傳統水提法、微波輔助提取法、超聲輔助提取法等111)

　　但關于不同溶劑對桔梗提取物進行萃取尚未報道。為了深入研究不同溶劑對桔梗中總多酚和總黃酮含量及萃取物抗氧化活性的影響，本文對桔梗根提取物進行不同溶劑的萃取，并對不同溶劑萃取物的抗氧化性進行了評價。以期為進一步開發和發展桔梗資源提供理論基礎和試驗依據。

　　1材料與方法

　　1.1材料與試劑

　　桔梗根：采于黑龍江省雞西市雞東縣;沒食子酸

　　標準品(色譜純)、福林-酚試劑、1，1-二苯基-2-三硝基苯(1，1-diphenyl-2-picrylhydrazy，DPH).2，2~聯氨-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸[2，2'-azinobis(3-ethylbenzothiaoline-6-sulphonic acid，ABTS].TPTZ試劑：美國Sigma公司;抗壞血酸、Trolox：美國Solarbio公司;試劑均為分析純。

　　1.2 儀器與設備

　　LGJ-1A-50真空冷凍干燥機：北京亞泰科隆儀器技術有限公司;RE-5203旋轉蒸發儀、SHZ-I型循環水真空泵：上海亞榮生化儀器廠;YP20002電子天平：上海越平科學儀器有限公司;G70D20CNIP-D微波爐：格蘭仕微波電器有限公司;TU-1810紫外可見分光光度計：北京普析通用儀器有限公司;萬能高速粉碎

　　機：上海菲力博實業公司。

　　1.3試驗方法

　　1.3.1樣品的制備

　　新鮮桔梗根洗凈、去皮、切片后置于真空冷凍干燥機中干燥至恒重，將干燥的桔梗根用粉碎機打磨成粉末。稱取10g的粉末，加入30倍體積的50%乙醇溶液，210 w的微波條件下，提取60 s，過濾出濾渣并收集濾液，在此條件下提取兩次，合并濾液。將上述濾液冷凍干燥收集粉末，將粉末溶解于250 ml.容量瓶中，取40ml.溶液與等體積石油醚混合，置于分液漏斗中，振蕩溶液使得兩種液體充分接觸，靜置30 min，收集上層石油醚相，將下層水相按上述方法再萃取3次。并按以上方法進行正丁醇、乙酸乙酯、正丁烷的萃取。將相同溶劑萃取液合并，進行減壓濃縮、冷凍干燥得不同溶劑萃取物。

　　1.3.2 總多酚含量的測定

　　桔梗根提取物不同溶劑萃取物中總多酚含量的測定，采用福林-酚測定法"，吸取萃取液1ml、蒸餾水5mL、福林-酚試劑1 ml.于試管中，充分混合并靜置5 min后，加入3 mL.7%碳酸鈉溶液，充分混合后，70℃避光反應20 min，在765 nm波長下測定其吸光度。以不同濃度沒食子酸標準品溶液代替萃取液按以上步驟操作，繪制標準曲線，得到線性回歸方程為y=

　　5.827 3x+0.327 2(R-0.999 3)。把測定樣品吸光度代入方程，即得到總多酚含量。

　　1.3.3 總黃酮含量的測定

　　桔梗根提取物不同溶劑萃取物中總黃酮含量的

　　測定，采用硝酸鋁顯色法測定11，吸取萃取液1.5mL.

　　蒸餾水和1 ml.5%的亞硝酸鈉水溶液于試管中，充分混合后靜置5min，再加入1 ml.10%的硝酸鋁，充分混合后靜置5min，再加10 mL.10%的氫氧化鈉水溶液，充分混合15 min后，在510mm波長下測定其吸光度。

　　以不同濃度蘆丁標準品溶液代替萃取液按以上步驟操作，繪制標準曲線，得到線性回歸方程為y 0.000 7x-

　　0.006 4(R-0.999 3)。把測定樣品吸光度代入方程，即得到總黃酮含量。

　　13.4抗氧化能力的測定

　　1.3.4.1 鐵還原能力的測定

　　鐵還原能力的測定采用鐵離子還原法(ferric ion reducing antioxidant power，FRAP)，參照朱尚彬、楊少輝等6m的方法略做改動，將0.1 ml.樣品.3 mL.酷酸鹽緩沖溶液(pH3.6).0.1 mlL的TPTZ溶液(10 mmol/L)

　　和0.1 ml.的三氯化鐵溶液(10 mmol/L)充分混合，放置25 ℃條件下反應6min，并于700 mm處測定其吸光度。并以vc為對照組，按以上步驟進行試驗。

　　13.4.2超氧陰離子自由基清除率測定

　　參照李斌等網的方法略做改動，吸取200山樣

　　品、5.7 ml.Tris-HCI緩沖溶液(0.05 moll.，pH 8.20)和

　　0.1 mlL鄰苯三酚溶液(6 mmol.)于試管中，充分混合后，在320mm波長處測定其吸光度，記為A;按上述試驗步驟，以等體積蒸餾水代替樣品測定其吸光度，記為Ao;以等體積蒸餾水代替鄰苯三酚溶液測定吸光度，記為A:;并以Vvc為對照組，按以上步驟進行試驗。

　　按照公式計算超氧陰離子自由基清除率。

　　清除率/%=(1-4i A)x 1001.3.4.3羥自由基(-OH)清除能力的測定參照白生文等["的方法略做改動，吸取3ml.樣品、2 ml.硫酸亞鐵溶液(0.1 mol/L).2 ml.水楊酸溶液

　　(0.1 mol/L)和2 ml.過氧化氫溶液(0.1 mol/L)于試管中，充分混合后，37 ℃水浴條件下反應30 min，在510 nm波長處測定其吸光度，記為A;按上述試驗步驟，以等體積無水乙醇代替樣品測定其吸光度，記為Ao;以等體積蒸餾水代替過氧化氫溶液測定吸光度，記為A;并以Vc為對照組，按以上步驟進行試驗。

　　按照公式計算-0H清除率。

　　清除率/%=(1-Ai-AL)x 100

　　Ao

　　1.3.4.4 DPPH自由基清除能力的測定參考Li Xiuxia等四方法的基礎上略做改動，吸取2 ml.DPPH乙醇溶液(0.1 mol/L)和2ml.樣品溶液于試管中，充分混合后室溫25℃避光反應30min，在517mm波長處測定其吸光度，記為A;按上述試驗步驟，以等體積無水乙醇代替樣品測定其吸光度，記為Ao;以等體積無水乙醇代替DPPH乙醇溶液測定吸光度，記為A;并以vc為對照組，按以上步驟進行試驗。

　　按照公式計算DPPH自由基清除率。

　　1.3.4.5 ABTS.清除能力的測定參考Garzon GA等P方法的基礎上略做改動，用甲醇將ABTS溶液在734mm處的吸光度調整為0.7土0.02，記為Ao;吸取200 uL樣品和4ml.ABTS溶液于試管中，充分混合后室溫25 ℃避光反應30min，在517mm波長處測定其吸光度，記為A;并以Tolox為對照組，按以上步驟進行試驗。按照公式計算ABTS..

　　清除率。

　　ABTS"清除率/%-(1-)× 1001.4 數據處理與統計分析

　　本試驗采用Origin9.1軟件繪圖，SPSS22.0軟件對數據進行單因素方差分析，所有試驗均重復3次。

　　2結果與分析

　　2.1不同溶劑萃取物總多酚含量

　　桔梗根提取物不同溶劑萃取物總多酚含量如圖1

　　由圖1可知不同溶劑萃取物總多酚含量：正丁醇>石油融>乙酸乙酯>正已烷，且各萃取相中總多酚含量差異明顯。其中正丁醇萃取物明顯高于其他組總多酚含量為(4.020.097)mg/g，是石油醚萃取物的

　　1.3倍，乙酸乙酯萃取物的3倍，正己烷萃取物的3.5倍。說明桔梗根提取物經過不同溶劑萃取后，正丁醇和石油醚萃取物富集多酚類物質的能力最好，可以富集大部分的多酚類物質;而乙酸乙酯和正已烷萃取物富集多酚類物質的能力較弱，說明多酚類物質在這兩種溶劑中溶解度較差。這4種溶劑極性排序為：石油醚<正已烷<乙酸乙酯<正丁醇，說明桔梗根提取物中多酚更容易溶解于極性較大或者極性較小的溶劑中。

　　2.2不同溶劑萃取物總黃酮含量

　　不同溶劑萃取物的總黃酮含量見圖2

　　由圖2可知，桔梗根提取物不同溶劑萃取物總黃酮含量差異顯著，其中含量最高的為石油萃取物，為(1.54550.055)mglg，含量最低的為正已萃取物，為(0.403±0.019)mg/g。不同溶劑萃取總黃酮含量：石油醚>正丁醇>乙酸乙酯>正己烷，其中石油醚萃取物中總黃酮含量是正丁醇的14倍，乙酸乙蘭萃取物的3倍，正己烷萃取物的3.8倍。說明黃酮類物質更容易溶解到極性小的溶液中。液-液萃取不僅可以增加黃酮的含量，而且可以提高黃酮的純度，還具有操作簡便，能耗較小的優點，被廣泛用于提取及純化的技術上網。

　　23抗氧化活性測定結果

　　23.1 鐵還原能力分析

　　通常用FRAP法來表示樣品的鐵還原能力，吸光度越大表示還原能力越強。不同溶劑萃取物的鐵還原能力見圖3。

　　圖3中隨著樣品濃度的增加，吸光度也隨之增大，由此可知，樣品的鐵還原能力與濃度呈正相關。正丁醇萃取物的鐵還原能力明顯高于其他萃取物，其中正己烷萃取物顯示出較弱的鐵還原能力，陽性對照組ve的鐵還原能力優于各萃取物。各萃取物的鐵還原能力大小依次為：正丁醇>石油醚>乙酸乙酯>正已烷。

　　2.3.2超氧閉離子自由基清除能力

　　不同溶劑萃取物對超氧陰離子自由基清除能力見圖4

　　由圖4可知，桔梗根提取物不同溶劑萃取物對超氧陰離子自由基清除能力存在劑量依賴效應，在20 ug/mL-100 ug/mL的濃度范圍內，超氧陰離子自由基的清除率與萃取物濃度成正比，且各萃取物對超氧陰離子自由基的清除率各不相同。陽性對照組vc明顯高于各溶劑萃取物，正丁醇萃取物的超氧陰離子自由基清除率最好。

　　不同溶劑萃取物的ICo值見表1。

　　如表1所示，正丁醇萃取物清除02-的IC，為

　　(39.3221.712)ug/ml，正已烷萃取物的超氧陰離子清除率最弱，其ICo為(98.1562.035)ugml。各萃取物超氧陰離子自由基清除能力大小依次為：正丁醇>石油醚>

　　乙酸乙酯正已烷。

　　2.3.3羥自由基(.OH)清除能力

　　桔梗根提取物不同溶劑萃取物的羥自由基清除能力如圖5所示。

　　隨著各樣品濃度的增加，其羥自由基清除率也隨之增加，陽性對照組vc羥自由基清除率明顯低于各萃取物，正丁醇萃取物的羥自由基清除率優于其他組，由表1可知其IC，為(0.148±0.024)4g/ml，各萃取物中，羥自由基清除率最低的為正己烷萃取物，其IC，值為(0.4730.009)uy/ml。各萃取物羥自由基清除能力大小依次為：正丁醇>石油醚>乙酸乙酯正已烷。

　　2.3.4 DPPH.清除能力

　　不同溶劑萃取物對DPPH自由基清除能力見圖6由圖6可知，陽性對照組vc和各溶劑萃取物在試驗濃度范圍內，對DPPH·清除活性隨質量濃度的增加而增強，陽性對照組VeDPPH.清除率略高于各萃取物，在4種溶劑萃取物中，正醇萃取物對DPPH.

　　的清除能力最強，由表1可知其1Co值為(0.3240.032)g/ml，正己烷萃取物對DPPH.的清除能力最弱，其IC，值為(0.472±0.019)ugmlL。桔梗根提取物不同溶劑萃取物對DPPH.的清除作用大小順序為：正丁醇>石油醚>乙酸乙酯>正己炕。

　　2.3.5 ABTS.清除能力

　　ABTS"自由基清除法被廣泛利用于評價樣品的抗氧化能力，不同溶劑萃取物對ABTS.清除能力見圖7。

　　由圖7可以看出陽性對照組Trolox對ABTS自由基清除能力明顯優于各溶劑萃取物，各萃取物對ABTS.自由基清除效果與濃度成正比，隨著濃度的增大，對ABTS-自由基清除效果越好。各萃取物中對ABTS，自由基清除效果最好的是正丁醇萃取物，當濃度達到100 ug/ml.時，對ABTS自由基清除率達到92.59%，由表1知其1Co值為(0.014±0.001)ug/mL;對ABTS5，自由基清除率最低的是正已烷萃取物，其ICso為(0.37650.044)y/ml。桔梗根提取物不同溶劑萃取物對ABTS.自由基的清除作用大小順序為：正丁醇>石油醚>乙酸乙酯>正已烷。

　　3結論

　　本試驗選取了不同的溶劑對桔梗提取物水溶液進行萃取，結果表明，正丁醇萃取物中總多酚含量最高，石油醚萃取物中總黃酮含量最高。由于提取物含有多種活性物質，若使用單一評價方法不能全面的評價其抗氧化性嗎。故本試驗測定各萃取物的鐵還原能力、超氧陰離子自由基清除能力、羥自由基清除能力、DPPH 清除能力和ABTS.清除能力，以期更加全面的評價各萃取物的抗氧化性。結果表明，正丁醇萃取物的抗氧化活性最強，其次是石油醚萃取物。根據本試驗結果，可以得出，正丁醇萃取物可以被用來對桔梗中的多酚進行進一步的分離純化;石油醚萃取物可用作桔梗中黃酮進一步的分離純化;正丁醇萃取物在抗氧化性能上較為突出，具有被開發成天然抗氧化劑的潛能。

　　參考文獻：

　　[1]Xu YX.Dong Q.Qiu H，et al.A bomogalacturonan from the Radit of Platycodon grandijflonam and the anti-angiogeresis activity of poly-loligogalactaronie acids derived therefrom[J].Carbolydrate Research，2011，346(13)：1930-1936，

　　[2]Qiu H W，Zhou QC，Geng J.Pyrolytie and kinetic dharacteristies o Pidycadon Grandiflonum peel and its cellulose extract[J].Carbolydrate Polymers，2015，117：644-649.

　　[3]Hwang Y P，Choi J H，Kin H G，et al.Saponins，especially platycodin D，from Platyeadon grandijloran modulate hepatie lipogenesis in high-fat diet-fed ralts and high glucose-exposed HepG2 cellsJ Toxicdogy and Applied Phamacology，2013，267(2)：174-183.

　　[4]陳慶梅，王玉枝，朱洪彬，等，中藥葛根提取物中抗氧化活性成分的篩選J].分析化學，2009，37(A02)212-213.

　　[5]劉繼攀，張紫華，關振華，等，兩種真姬菇不同溶劑提取物的抗氧化活性研究[J].食品工業科技，2018，39(11)56-61.

　　[6]李安林，熊雙麗，馬橢，等，不同溶劑萃取觀音紫葉黃酮級分抗氧化能力的主成分分析J]糧食與油脂，2019.32(3)90-93.

　　[7]喻艷，逆海朋，賈亞橢，桑椹中酚類物質極性分布及抗氧化活性評價J，食品與發酵工業，2017，43)：73-79.

　　[8]Can JG，Xia X.Chen X F.et al.Characterization of flavonoids from Dryopteris erthresora and evaluation of their antioxidanl，anticancer and acetyleholinesterase inhibition activities[J.Food andd Chenical Taxicology，2013，51：242-250.

　　[9 Celli G B.Pereina-Netto A B，Beta T.Comparative analysis of total phenodie contenl，antiosidant activity，and flavonoids profile of fnits fromn two varieties of Brazilian cherry(Eugenin aniflora L.)throughout the fruit developmental stages[J].Food Research Internatiemal，2011，44(8)：2442-2451.

　　[10]Seeramn N P，Aviram M，Zhang Y J，et al.Comparison of antioxidant potency of commonly consumed polypbend-rich bevenages in the United StatesJ]Journal o Agricultual and Food Chemistry，2008.56(4)：1415-1422.

　　[11]吳碧元，孫軍，蔣紅芳，桔梗提取工藝的研究[].中藥材，2002，25(6)：430-432.

　　[12]陳塵，陳勤、桔梗提取工藝及質量控制的研究進展[J]現代中藥研究與實踐2009，236：81-84，

　　[13]孫曉春，張偉強，唐平生，等，桔梗提取物的主要成分和抗氧化性的測定[J].中國農學通報，2017，33(31)：139-144.

　　[14]許璃如，張秀玲，李晨，等，微波提取桔梗根多酚工藝優化及抗氧化特性研究JOL，食品與發酵工業：1-192020-01-25)，htps：Mbi.agy10.13995.ckil 1235.0291.

　　[15]王矩，張秀玲，高寧，等，老山芹全株及其不同部位酚類物質含量及抗氧化能力分析J]食品科學，2019，40(7)54-59.

　　[16]朱尚彬，聶少平，朱盼，等，黑靈芝不同溶劑提取物抗氧化活性比研食 科學，2009，30(7：98-101.

　　[17]楊少輝，宋英令，王潔華，等，雪蓮果體外抗氧化和自由基清除能力].食品科，2010，31(17：166-169.

　　[18]李斌、雷月，孟寵軍，等，響應面試驗優化超聲波輔助提取藍旋果多酚工藝及其抗氧化活性J食品科學，2015，36(22)：33-39

　　[19]白生文，湯超，田京，等，沙棘果渣總黃酮提取工藝及抗氧化活性分析1].食品科學，2015，36(10：59-64.

　　[20]LiX X，Han L J.Chen L.J.In witro antioxidant activity of protein hydrdlysules prepared from com gluten mealJ].Joumal of the Seience of Food and Agriaulture，2008，88(9)：1660-1666.

　　[21]Garzón G A，Narvdex C E.Riedl K M.et al.Chemical composition，anthocyanins，non-anthocyanin phenolics and antioxidant activity of wild bilberry(Vacciniam meridionale Swartz)from Codombia[J].Food Chemistry，2010，122(4)：980-986.

　　[22]林戀竹，趙謀明，反應時間對DPH.法、ABTS.法評價抗氧化性結果的影響J]食品科學，2010，31(5)63-67.

　　[23]李現日，張杰張英美等.金花葵花黃酮提取物不同溶劑萃取物的抗氧化活性食品工業科技，2019 40()20-125.

　　[24]田強，趙琳，羅毅沖，等，厚樸籽不同溶劑萃取物抗氧化活性比較分析J.食品工業科技，2019，40(18)：54-58，64.

　　[25]楊思敏幾種中草藥提取物中抗氧化活性成分的篩選和鑒定[D.長春：長春師范大學，2013.